摇瓶液体菌种制作工艺

一 液体培养基配方：葡萄糖 20克  蛋白胨 10克  硫酸镁 0.5克  硫酸二氢钾 1克  水 1000ml

二 液体培养基的制作步骤 ：

1 称量 溶解：按配方称量药品，将药品置于烧杯中加水，玻璃棒搅匀。

2 分装：分装三角瓶时避免培养液黏住瓶壁口，用漏斗进行分装，三角瓶装料系数60％。

3 加棉塞：棉塞大小，松紧度要适中，一般塞入3-4厘米。

4 装锅灭菌：塞好棉塞的三角瓶用双层报纸包扎好，装入灭菌锅，盖上报纸，排气后，待温度升至121℃开始计时，温度控制在121—123℃，维持50min。

5 烘棉塞：当压力降至0.05MPa时带压进入无菌室，当压力即将降至零时开始放气，打开锅盖拿出报纸，将锅盖嵌一小缝，以此来烘干棉塞， 维持40—50min。

6 冷却：取出三角瓶放在超净工作台或接种箱中，冷却后进行接种。

三 接种工艺 ：

A 母种为试管菌种的接种工艺

1 选取新培养好的试管斜面菌种1支（若从冰箱中取出需提前24小时活化），松动三角瓶的棉塞，以备接种方便，在酒精灯火焰旁将棉塞顺时针旋转松动，放在一旁，拿起接种钩在火焰上烧红，并慢慢倾斜灼烧，接种时伸入试管琼脂下部，快速冷却，除去菌种前端菌丝和气生菌丝。

2 右手拔出三角瓶棉塞握在手里，用接种钩挑取斜面的50%切成4×4mm的接种块5-6块，迅速放入三角瓶中。

3 试管菌种迅速放回酒精灯旁，接种钩也放回试管中，棉塞再次塞入时要经过灼烧。

4 取双层报纸包扎好瓶口，在三角瓶上贴好标签，注明菌种明称，培养基配方，接种日期，然后放到摇床上进行培养。

5 清洁超净工作台。

B 母种为平皿菌种的接种工艺

1 选取新培养好的平板菌种一个（若从冰箱中取出需提前24小时活化），松动三角瓶的棉塞，以备接种方便，在酒精灯火焰旁将棉塞顺时针旋转松动，放在一旁，而后在酒精灯旁将平板封口膜撕掉，拿起接种钩在火焰上烧红，并慢慢倾斜灼烧，接种时将平皿盖打开放在一旁，在平板菌种上进行划线（中间接种块不纳入接种部分）平均接种块为0.5*0.5cm，划线后接种钩暂放在试管架上。

2 右手拔出三角瓶棉塞握在手里，用接种钩挑取4-5块接种块，迅速放入三角瓶中。

3平板菌种迅速放回酒精灯旁，接种钩也放回平皿中，棉塞再次塞入时要经过灼烧。

4 取双层报纸包扎好瓶口，在三角瓶上贴好标签，注明菌种明称，培养基配方，接种日期，然后放到摇床上进行培养。

5 清洁超净工作台。

四 液体菌种的培养：

1 三角瓶置于摇床上或者磁力搅拌器上进行培养，温度控制在23—24℃，转速或频率逐渐升高。

2 定时观察培养液颜色，菌球形态，如发现异常立即进行鉴定（测ph，镜检菌丝，取样培养）。

3 菌龄一般控制在6—8天，此时培养液内出现大量菌球，培养液呈黄白色，带有苹果酸味道。

4 将培养好的液体种子进行综合检测后供给发酵罐进行接种，待发酵罐接种后同时对液体种子进行镜检、空培养、取样。